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定制设计的微流体芯片保持器被用来TZ-接枝硅纳米线整合具有覆盖聚二甲基硅氧烷选自修饰以诱导混沌混合(25,28),以形成一点击芯片的微通道的一个网络的(PDMS)分量,如图所示。 1,一种互补生物正交基序(即,TCO)的共价缀合(29)到抗EpCAM。然后将所得的TCO-抗EpCAM缀合物捕获之前接枝到目标的CTC。 PDMS的混乱混频器集成,方便TCO接枝的CTC和TZ-嫁接硅纳米线之间的直接物理接触。为了优化点击芯片的操作参数中,我们通过尖峰200的EpCAM阳性NSCLC细胞成在标准RPMI 1640培养基(200微升)新鲜纯化的人类WBC(5×106个细胞的ML-1)制备的人造CTC样品。对于细胞成像和计数期间便利性和精确度,这些NSCLC细胞用尖峰前的DIO绿色荧光染料预染,而白细胞用一个DID红色荧光染料预染。我们最初使用具有代表重排ROS1一个NSCLC细胞系,即,HCC78(SLC34A2-ROS1重排),以测试和优化CTC捕获和释放(图3A)的性能。进行CTC捕获研究之前,TCO-抗EpCAM与人工NSCLC样品在室温孵育30分钟。洗去多余的抗体后,TCO移植模型CTC的样品通过点击芯片上运行。硅纳米线的固定化的细胞或随后释放/纯化的细胞混合物用4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色,并使用荧光显微镜(Nikon 90I)计数。

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